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    alpco試劑常見問題與解答

    發(fā)布時間: 2023-02-15  點擊次數(shù): 1153次

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    alpco常見問題與解答

    問:我購買的試劑盒可以使用什么樣的樣品類型?

    A.每種類型的試劑盒都經(jīng)過了方案中所示樣品類型的驗證。所有其他樣本類型都必須經(jīng)過內(nèi)部驗證。請聯(lián)系ALPCO的產(chǎn)品支持團隊,了解產(chǎn)品用戶可能進行的其他樣本類型測試的更多信息。

    問:該試劑盒是否與其他物種交叉反應(yīng)?

    A.每種試劑盒均已針對方案中所示的物種進行了驗證。盡管可能存在交叉反應(yīng)性,但需要在內(nèi)部對其他物種進行驗證。請聯(lián)系ALPCO的產(chǎn)品支持團隊,了解產(chǎn)品用戶可能進行的物種驗證的更多信息。

    問:我運行了多少標準和控制?

    A.每個試劑盒至少包括一套標準品(或一小瓶待稀釋的標準品),在大多數(shù)情況下包括一個或兩個對照品。每次進行分析時,必須運行標準品和對照品(如果包括),強烈建議運行所有標準品/對照品/和樣品一式兩份。

    問:我可以使用其他試劑盒或批次的試劑嗎?

    答:沒有。不要用其他套件或批次的部件替代。

    問:我可以修改培養(yǎng)時間或溫度嗎?

    答:沒有。請不要偏離協(xié)議。

    問:我可以使用過期的工具包嗎?

    答:沒有。如果試劑盒超過了試劑盒標簽上規(guī)定的有效期,則不應(yīng)使用該試劑盒。

    問:我可以使用放置在室溫下的試劑盒嗎?

    A.請確保試劑盒及其組件按照試劑盒插頁中的指示存放。有關(guān)試劑盒在室溫下穩(wěn)定性的更多信息,請聯(lián)系ALPCO的產(chǎn)品支持團隊。

    問:我可以跳過在化驗中運行對照嗎?

    答:否。如果提供了對照品,請務(wù)必在每次分析中運行對照品。對照品的濃度應(yīng)在分析證書規(guī)定的范圍內(nèi)。

    問:我可以用多通道移液管清洗盤子嗎?

    答:我們不建議使用多通道移液管。必須用足夠且相等的力分配沖洗緩沖液,以正確沖洗井。我們建議使用Statmatic清洗噴嘴tricontinent或自動洗板機。請參閱網(wǎng)站資源"部分的學(xué)習(xí)中心"選項卡,獲取顯示正確洗滌技術(shù)的視頻,或單擊此處。

    問:有必要對我的樣品進行布局嗎?

    答:非常重要的是,要知道你的標準品、對照品和樣品在板上的位置,以便正確生成結(jié)果。單擊此處獲取可下載的圖版。這也有助于在潷析過程中,在板條松動的情況下,在板上標記板條(在兩端使用小標簽)。

    問:為什么洗滌步驟如此重要?

    A.正確清洗平板是運行任何成功ELISA的一個非常關(guān)鍵和重要的方面。洗盤子時要保持一致。過快或過慢地清洗平板、不全清洗或抽吸以及讓孔保持干燥都是影響測定精度的因素。我們不建議為此目的使用多通道移液管。多通道移液管沒有施加足夠的壓力來底去除未結(jié)合的材料,這將導(dǎo)致更高的背景噪聲。網(wǎng)站的學(xué)習(xí)中心部分提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻,或單擊此處。

    問:我可以冷凍和解凍我的樣品多少次?

    A.建議的冷凍/解凍周期因套件而異。我們建議避免重復(fù)冷凍和解凍循環(huán),除非手冊中另有說明。如果采集的樣本量允許,準備并冷凍等分試樣,以消除或減少冷凍/解凍循環(huán)。

    問:我可以使用自己的“自制"緩沖器嗎?

    A.每個試劑盒都含有稀釋劑和緩沖液,其配方與特定的樣品類型緊密匹配。如果使用未隨試劑盒提供的組件進行檢測,制造商將不保證試劑盒的性能。

    問:如果稀釋劑用完了怎么辦?

    A.提供足夠的試劑,以在遵循方案時運行整個試劑盒。如果您的研究類型需要更高的稀釋度,請在設(shè)置分析之前計算所需的稀釋劑量,并且可以購買額外的稀釋劑。請聯(lián)系客戶支持以獲取有關(guān)單個組件可用性的信息。

    問:我的控制裝置超出范圍。我的數(shù)據(jù)是否無效?

    A.對照品的濃度必須在分析證書規(guī)定的范圍內(nèi)。如果對照超出范圍,化驗可能無效。此外,確保已使用協(xié)議中建議的曲線擬合。如果提供了多個建議,則使用適合標準數(shù)據(jù)點的回歸方法。

    問:我的標準曲線沒有得到很好的值。我可以使用協(xié)議中的示例值嗎?

    答:沒有。切勿使用示例值來計算化驗結(jié)果。應(yīng)根據(jù)每次測定獲得的標準值/校準值生成樣品濃度。

    問:我的樣本產(chǎn)生的OD值超出標準范圍。我還能計算濃度嗎?

    A.只能使用標準曲線范圍內(nèi)的樣本值。超出此范圍的值通常不是線性的,可能導(dǎo)致錯誤的推斷結(jié)果。

    問:我的標準曲線很好,但我的樣本沒有得到信號。為什么?

    A.樣品可能含有分析物,但基于試劑盒的靈敏度,無法檢測。樣本的矩陣也可以掩蓋檢測。確保按照方案中的規(guī)定進行稀釋,并審查程序,以確保所有試劑的添加量和順序正確。

    問:我可以運行多少個樣本?

    A.ALPCO現(xiàn)在提供了一個工具來幫助計算一個套件中可以運行的樣本數(shù)量。一旦您審查了協(xié)議以確定您計劃運行的特定試劑盒可能需要的標準品、控件和空白品的數(shù)量,請單擊此處進入樣本計算器。

    Q.什么是參考波長?

    A.參考波長是用于校正(標準化)主波長OD值的次級波長。這有助于解釋鋼板中的缺陷。

    問:為什么450nm是常用的測量波長?

    A.測量波長由每個試劑盒中使用的基質(zhì)確定。最常見的是TMB。它產(chǎn)生一種在650nm波長下可測量的藍色。它可以通過停止與1M磷酸或1M硫酸的反應(yīng)而用于終點測定。酸化時形成黃色反應(yīng)產(chǎn)物,其在450nm下可測量。

    Q.測量波長和參考波長之間的區(qū)別是什么?

    A.測量波長和參考波長之間的主要區(qū)別在于,第一個波長用于讀取基板產(chǎn)生的吸光度,第二個波長(參考波長)用于檢測板中的缺陷。

    問:我可以在沒有參考波長的情況下讀取該板嗎?

    答:是的,你可以。然而,使用參考波長可以提高測定的靈敏度。

    ELISA故障排除指南

    查看完整的ELISA故障排除指南

    鋼板清洗不足

    對于自動清洗機:檢查噴嘴是否堵塞,驗證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護信息,請參閱用戶手冊。

    對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機,特別是在進行化學(xué)發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

    不要跳過清洗或浸泡步驟。

    添加綴合物或基質(zhì)期間多通道移液管出現(xiàn)問題

    檢查多通道移液管校準。確保所有端固定牢固,每次更換端時,吸取相同體積的液體。觀察氣泡并考慮反向吸移技術(shù),以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

    移液技術(shù)

    檢查單吸管校準。觀察氣泡并考慮反向吸移技術(shù),以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

    井內(nèi)氣泡

    確保在每個清洗步驟后用力敲打板,使其干燥,以盡量減少孔中殘留的清洗緩沖液。加入分析試劑(尤其是基質(zhì))后殘留在孔中的氣泡應(yīng)在平板培養(yǎng)和平板讀數(shù)之前去除??梢允褂酶蓛舻囊埔汗芏藖砣コ龤馀?。

    僅樣本的重復(fù)之間精度差(高CV值)

    樣品混合不足

    在移液之前對每個樣品進行渦流,以確保樣品均勻。

    移液技術(shù)

    在將第一個樣本復(fù)制品轉(zhuǎn)移到平板之前,將樣本從端吸入和取出兩次,以覆蓋端內(nèi)部。在轉(zhuǎn)移樣品時,確保沒有樣品液滴粘附在端的外部。如果容量允許,考慮采用反向吸移技術(shù),以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

    鋼板清洗不足

    對于自動清洗機:檢查噴嘴是否堵塞,驗證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護信息,請參閱用戶手冊。

    對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗??紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機,特別是在進行化學(xué)發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

    不要跳過清洗或浸泡步驟。

    高樣本和低樣本的結(jié)轉(zhuǎn)

    確保每個樣本之間的端都發(fā)生了變化。每次孵育時使用新的平板密封劑。

    樣品稀釋緩沖液錯誤

    如果樣品需要稀釋,確認使用了適當?shù)南♂尵彌_液。

    標準曲線不佳(與之前的結(jié)果或分析證書不匹配)

    鋼板清洗不足

    對于自動清洗機:檢查噴嘴是否堵塞,驗證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護信息,請參閱用戶手冊。

    對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機,特別是在進行化學(xué)發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

    不要跳過清洗或浸泡步驟。

    移液技術(shù)

    檢查移液管校準。觀察氣泡并考慮反向吸移技術(shù),以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。

    試劑混合不充分

    使用前,讓重組試劑放置在手冊中所示的時間長度內(nèi)。使用適當?shù)脑O(shè)備(渦流混合器等)確保試劑在使用前是均勻的。如果混合試劑盒試劑以形成“工作"成分,則確認使用了正確的體積和稀釋劑。

    板材晃動不足

    不正確的搖動運動會導(dǎo)致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動板。建議使用半徑很小的軌道運動振動器。參見示例。

    添加到井中的試劑量錯誤

    檢查剩余體積,以確認向孔中添加了正確體積的試劑。

    制備試劑的儲存

    確保所有試劑正確儲存并在規(guī)定期限內(nèi)使用。對于化學(xué)發(fā)光測定,預(yù)先制備魯米諾底物可導(dǎo)致信號降低。

    環(huán)境溫度低或不一致

    遵循方案中所示的培養(yǎng)溫度。

    化學(xué)發(fā)光儀器的差異

    信號,或相對光單位(RLU),可以在不同的化學(xué)發(fā)光板讀數(shù)器之間顯著變化。典型"標準曲線或分析證書中顯示的信號可能與觀察到的信號非常不同。

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