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1.     介導(dǎo)免疫原性試驗(yàn)檢測(cè)循環(huán)抗藥性抗體(adas)已成為生物治療學(xué)研究的重要手段，因?yàn)檫@些高分子重量藥物可引起潛在的有害免疫反應(yīng)，影響藥物的療效和安全性。在許多策略中，這種大分子的潛在免疫原性可以通過(guò)附加聚乙二醇(peg)聚合物來(lái)減少。聚乙二醇與藥物或治療蛋白的共價(jià)連接可以保護(hù)生物治療免受宿主免疫系統(tǒng)的影響，通過(guò)掩蓋其免疫原性表位來(lái)降低其免疫原性，同時(shí)通過(guò)增加藥物的流體動(dòng)力學(xué)大小來(lái)延長(zhǎng)藥物的循環(huán)半壽命，從而減少腎間隙。Peg 由于其結(jié)構(gòu)和低電荷密度，一直被認(rèn)為是不具有免疫原性的，但直到最近，這種觀點(diǎn)大多是軼事性的?；趩为?dú)的大小，聚乙二醇聚合物在分子大小范圍內(nèi)通常用于藥物設(shè)計(jì)(10至40千達(dá))是潛在的免疫原性。Richter 和 akerblom (1983,1984)在用聚乙二醇化蛋白免疫的動(dòng)物中成功地產(chǎn)生了抗聚乙二醇抗體，1984年，在第一種聚乙二醇化藥物獲得批準(zhǔn)之前，已經(jīng)報(bào)道在人體中存在抗聚乙二醇抗體。他們計(jì)算出0.2% 的健康人群有抗 peg 抗體，這些抗體大部分是 igg。他們還得出結(jié)論，為了用聚乙二醇化過(guò)敏原進(jìn)行減敏治療，這些抗體并不構(gòu)成重大問(wèn)題。根據(jù)后來(lái) leger 等人(2001年)、 armstrong 等人(2003年)和 garratty 等人(2004年)的研究，抗 peg 抗體在健康人群中的發(fā)生率要高得多(22-25%)。此外，誘導(dǎo) peg 免疫并不像最初認(rèn)為的那樣無(wú)害。 gansonet al. (2006)報(bào)告說(shuō)，與未免疫的患者相比，用聚乙二醇化酶治療難治性 goutsulted 的患者產(chǎn)生 peg 特異性抗體的清除率更高。Armstrong 等人(2007年)報(bào)告了在 peg-immune 淋巴細(xì)胞白血病患者接受 peg 化天冬酰胺治療時(shí)快速清除藥物的相似結(jié)果。這兩個(gè)例子中的抗 peg 抗體的存在都會(huì)增強(qiáng)給藥藥物的有效性。事實(shí)上，幾個(gè)動(dòng)物的 igm 和 igg 抗體現(xiàn)在已經(jīng)成功地開發(fā)針對(duì) peg 聚合物的進(jìn)一步證明了這些結(jié)構(gòu)的免疫原性[ cheng et al. (2000) ，cheng et al. (2005)]。因此，檢測(cè)與生物治療分子相關(guān)的 adas 是藥物安全研究的必要組成部分，需要一種普遍適用于所有聚乙二醇化蛋白質(zhì)藥物的標(biāo)準(zhǔn)方法。雙抗原橋接免疫原性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)已成功地應(yīng)用于該領(lǐng)域。該方法可以檢測(cè)到不同長(zhǎng)度的聚乙二醇聚合物抗體，并附有不同的官能團(tuán)，是檢測(cè)任何聚乙二醇生物治療產(chǎn)生的聚乙二醇特異性抗藥性抗體的一種有潛力的通用方法。圖2。材料和方法。采用 anp 技術(shù)制備了ー40kda 聚乙二醇偶聯(lián)物，制備了抗 peg 鼠單克隆 igm (anpeg-1)抗體，并以40kda 聚乙二醇作為免疫原制備了 anp 擁有屬性。校準(zhǔn)品是在一個(gè)天真的人血清庫(kù)中，通過(guò)連續(xù)稀釋這種抗體制備的。用 anptechnologies 公司的 peg (40kda)涂層96孔微孔板制備了化驗(yàn)稀釋液(pbs 緩沖液加 hama 阻斷劑)和化驗(yàn)洗滌緩沖液(pbs 加洗滌劑) ，并用 anp 技術(shù)制備了共軛小鼠抗半抗原抗體，用 anp 技術(shù)從 moss 公司的停止液(硫酸，2.0 n)中購(gòu)買了化驗(yàn)稀釋液(tmb) ，從 vwr 公司2.2中獲得了化驗(yàn)稀釋液(2.0 n)。Elisa 方法的優(yōu)化 elisa 方法的優(yōu)化是通過(guò)測(cè)試兩種可能的捕獲配置，40kda 聚乙二醇直接涂在平板上或生物素標(biāo)記版涂在鏈霉親和素活化平板上。采用生物素化聚乙二醇修飾的鏈霉菌素平板進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，采用生物素化聚乙二醇修飾的鏈霉菌素平板具有較好的信號(hào)動(dòng)力學(xué)范圍。將構(gòu)成橋配合物另一半的半抗原標(biāo)記藥物與樣品混合，加入生物素聚乙二醇固定的微孔中，然后與 hrp 標(biāo)記的抗單克隆抗體反應(yīng)。優(yōu)化了兩種標(biāo)記物的濃度和檢測(cè)孵育時(shí)間，以獲得優(yōu)良靈敏度和信號(hào)動(dòng)態(tài)范圍。用半抗原標(biāo)記和生物素化藥物預(yù)孵化血清樣品，然后加入包被良好的二價(jià)鏈霉親和素或小鼠抗半抗原抗體的檢測(cè)方法，靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍均不理想。將生物素化聚乙二醇預(yù)涂于鏈霉菌抗生素涂層平板上，獲得了優(yōu)良的靈敏度和信號(hào)范圍。

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